PENENTUAN
KADAR HEMOGLOBIN
Penanggung
Jawab : Hajar Tarwiyah ( J310120027 )
Anggota : Ina Sholihah (J310120005)
Ranisha Restzi
Antari ( J310120019 )
I.
Tujuan
1.Mengetahui
kadar Hb menggunakan metode sahli.
2.Mengetahui
kadar Hb menggunakan fotometrik atau cyanmethemoglobin.
3.Menetapkan
nilai haemotokrit.
II.
Prinsip
1.Hb
diubah menjadi hematin asam, kemudian warna yang terjadi dibandingkan serum
visual dengan standar pada haemometer.
2.Darah
dicampur dengan larutan drabkin ferisianida akan mengoksidasi Hb menjadi met-Hb
akan berikatan dengan sianida menjadi cian-met Hb. Cyanment-Hb mengabsorbsi sinar
pada 540 nm.
3.Nilai
hematokrit adalah volume semua eritrosit dalam 100 ml darah dan disebut dengan
½ dari volume darah itu.
III.
Tinjauan
Pustaka
Hemoglobin
adalah suatu senyawa protein dengan Fe yang dinamakan “Conjugated Protein”
sebagai intinya Fe dengan protophorpyin dan globin (tertapyrin) menyebabkan
warna merah dengan adanya Fe. ( Dwi, 2011 )
Hemoglobin
adalah protein yang kaya akan zat besi. Haemoglobin memiliki afinitas ( daya
gabung ) terhadap oksigen, dengan oksigen itu membentuk oksihemoglobin di dalam
sel darah merah. Dengan melalui fungsi ini maka oksigen dibawa dari paru – paru
ke jaringan – jaringan. Jumlah hemoglobin dalam darah normal kira – kira 5 gram
setiap 100 mL darah dan jumlahnya ini biasanya disebut “100 persen”. Dalam berbagai
bentuk anemia darah, kadar itu bisa dibawah 30% atau 5 gram setiap 100 mL,
karena hemoglobin mengandung zat besi yang diperlukan untuk bergabung dengan
oksigen, maka dapat dimengerti pasien semacam itu memperlihatkan gejala
kekurangan oksigen. (Pearce, 2009 )
Kadar
hemoglobin adalah salah satu pengukuran tertua dalam laboraturium kedokteran
tes darah yang paling sering dilakukan. Kisaran normal hemoglobin dipengaruhi
oleh berbagai variable dan kadar
harus diinterpretasikan dalam hubungannya
dengan beberapa faktor, yaitu kehamilan, penduduk pada daerah dengan ketinggian
yang tinggi, latihan fisik, merokok dan penyakit yang berkaitan. ( Bimantoro,
2011 )
Kadar
hemoglobin menggunakan satuan gram/dl, yang artinya banyaknya garam hemoglobin
dalam 100 mililiter darah. Berdasarkan dari umur pasien, nilai normal
hemoglobin terbagi menjadi :
o
Bayi baru lahir =
17 – 22 gram/dl
o
Umur satu minggu = 15 – 20 gram/dl
o
Umur satu bulan = 11 – 15 gram/ dl
o
Anak – anak = 11 – 13 gram/ dl
o
Lelaki dewasa = 14 – 18 gram/dl
o
Perempuan dewasa = 12 – 16 gram/ dl
o
Lelaki tua = 12,4 – 14,9 gram/ dl
o
Perempuan tua = 11,7 – 13,8 gram/ dl
(Bimantoro,
2011 )
Flematokrit
adalah presentase volume seluruh dari yang ada dalam darah yang diambil dalam
volume tertentu. Untuk tujuan ini, darah diambil dengan spuit dalam suatu
volume yang telah ditetapkan dan dipindahkan ke dalam suatu tabung khusus
berskala hemotokrit.
Untuk pengukuran hematokrit ini adalah tidak boleh dibiarkan menggumpal sehingga
harus diberi anti koagulan. (Kurniawan, 2010 )
Pemeriksaan hematokrit
merupakan salah satu pemeriksaan laboraturium dalam mendiagnosa penyakit demam
berdarah, dimana pada kasus tersebut terjadi penurunan kadar trombosit secara
drastis sampai bawah 100.000/mm3 yang diikuti dengan peningkatan
kadar hematokrit 20% atau lebih yang menunjukkan terjadi perembasan plasma atau
lebih, dianggap menjadi bukti definitive adanya peningkatan permiabelitas baik
pada pergantian volume darah secara dini atau oleh pendarahan. Nilai hematokrit
disebut dengan %. Normal untuk pria 40 – 48 vol % dan untuk wanita 37 – 43 vol
%. ( Kurniawan, 2010 )
Penurunan kadar
hematokrit dapat terjadi pada beberapa kondisi tubuh, seperti: anemia,
kehilangan darah akut, leukemia, kehamilan, malnutrisi, gagal ginjal. Sedangkan
peningkatan kadar dapat terjadi pada beberapa kondisi, seperti: dehibrasi,
diare berat, luka bakar, pembedahan. ( Kurniawan, 2010 )
IV. Alat dan Bahan
1. Alat
a) Pemeriksaan
kadar Hb dengan metode sahli
Haemometer yang terdiri dari :
o Tabung
Hb
o Batang
pengaduk
o Pipet
penghisap dan selang sahli
o Tabung
standart warna
b) Pemeriksaan
kadar Hb dengan metode fotometrik
o Pipet
gondok
o Bola
penghisap
o Tabung
reaksi
o Spektofotometer
c) Penentuan
skala HCT
o Skala
HCT
o Centrifuge
o Vitrex
o Tabung
mikropipet
d) Spuit
injeksi dan kapas alcohol
e) Botol
penampung darah dan antikoagulan
2.Bahan
a. Pemeriksaan
kadar Hb dengan metode sahli
o
Larutan HCl 0,1 N 5 tetes
o
Darah 0,02 mL atau 20 µL
o
Aquades Seperlunya
b. Pemeriksaan
kadar Hb dengan metode fotometrik
o Pereaksi
Drabkin 5 ml
o Darah
0,02 mL atau 20 µL
c. Penentuan
skala HCT
o
Darah vena 2/3 bagian
dari tabung mikropipet
V.
Cara
Kerja
1. Penentuan
Hb metode sahli
  5 tetes HCl ( 0,1 N )
sampai tanda merah diangka 2 |
  
HCl + 0,02 mL atau 20 µL darah dengan pipet penghisap |
Diamkan selama 3
menit
  
Ditambah aquades tetes demi tetes sampai warna sesuai standar |
Baca
kadar Hb-nya
2. 
Penentuan Hb
metode fotometrik
Penentuan Hb
metode fotometrik
 5 mL pereaksi Drabkins dengan
pipet gondok dan bola hisap |
 0,02 mL atau
20 µL darah masukkan dalam tabung reaksi  |
Dicampurkan
dengan memutar – mutarkan tabung
Diamkan 10 menit
Dibaca
pada fotometer
λ=
540 nm
3. Penentuan
skala HCT
Mengisi tabung
micropipet dengan darah sampai 2/3 bagian
Menutup salah
satu ujung dengan vitrex
Sentrifuge
selama 3 – 5 menit dengan kecepatan 16000 rpm
 |
Baca
skala dengan HCT
VI.
Hasil
Pengamatan
1.Pengukuran
kadar Hb dengan metode sahli
|
No
|
Perlakuan
|
Pengamatan
|
|||
|
1
|
HCl 0,1 N
|
  HCl 0,1 berwarna bening |
|||
|
2
|
Ditambah
20 µL darah vena
|
 Berwarna merah pekat
|
|||
3
|
Diaduk
dan diamkan 3 menit
|
Darah
bercampur dengan HCl
|
|||
|
4
|
Ditambah
aquades tetes demi tetes
|
Warnanya
semakin pudar
|
|||
|
5
|
Mengaduk
dengan pengaduk
|
Warnanya
semakin pudar
|
|||
|
6
|
Menambah
aquades tetes demi tetes
|
Warnanya
sama dengan standar warna
|
|||
|
7
|
Membaca
hasil
|
1. Menunjukkan
13,2 gram %
|
|||
|
2. Menunjukkan
12,4 gram %
|
·
Hasil penentuan
kadar Hb metode Sahli
Hasil penentuan
kadar Hb metode Sahli|
Kelompok
|
Sampel
|
X1
( g/dl )
|
X2
( g/dl )
|
X ( g/dl )
|
Keterangan
|
|
1
|
Darah
A
|
5,6 g/dl
|
5,8 g/dl
|
5,7 g/dl
|
Tidak normal
|
|
2
|
Darah A
|
12,4 g/dl
|
10,6 g/dl
|
11,5 g/dl
|
Tidak normal
|
|
3
|
Darah A
|
16,8 g/dl
|
16,2 g/dl
|
16,5 g/dl
|
Tidak normal
|
|
4
|
Darah A
|
16,8 g/dl
|
14,6 g/dl
|
15,7 g/dl
|
Tidak normal
|
|
5
|
Darah A
|
14,4 g/dl
|
12,8 g/dl
|
13,6 g/dl
|
Normal
|
|
6
|
Darah
B
|
7,8 g/dl
|
11,4 g/dl
|
9,6 g/dl
|
Tidak normal
|
|
7
|
Darah B
|
11,2 g/dl
|
14 g/dl
|
12,8 g/dl
|
Normal
|
|
8
|
Darah B
|
11,8 g/dl
|
12,2 g/dl
|
12 g/dl
|
Normal
|
|
9
|
Darah B
|
13,2 g/dl
|
12,4 g/dl
|
12,8 g/dl
|
Normal
|
|
10
|
Darah B
|
12,4 g/dl
|
12 g/dl
|
12,2 g/dl
|
Normal
|
|
11
|
Darah B
|
14 g/dl
|
14 g/dl
|
14 g/dl
|
Normal
|
2. Pengukuran
Hb dengan metode fotometrik
|
No
|
Perlakuan
|
Pengamatan
|
|
1
|
 5 mL Drabkins dimasukkan
ke tabung reaksi |
Drabkin
berwarna kuning kehijauan yang bening
|
|
2
|
 Ditambah 20 µL darah vena |
Larutan
berwarna merah pekat pada bagian bawah
|
|
3
|
Memutar
– mutar tabung reaksi
|
Warna larutan merata
|
|
4
|
Mendiamkan 10 menit
|
Terbentuk Cyanmethoglobin
|
|
5
|
Membaca hasil dengan
spektofotometer
|
1.
Menunjukkan hasil 12,89 gr/dl
|
|
2.
Menunjukkan hasil 13,24 gr/dl
|
·
Hasil penentuan kadar
Hb metode fotometrik
|
Kelompok
|
Sampel
|
X1
( g/dl )
|
X2
( g/dl )
|
X (
g/dl )
|
Keterangan
|
|
1
|
Darah A
|
4,36 g/dl
|
4,15 g/dl
|
4,25
g/dl
|
Tidak normal
|
|
2
|
Darah A
|
9,89 g/dl
|
10,92 g/dl
|
10,40
g/dl
|
Tidak
normal
|
|
3
|
Darah A
|
9,89 g/dl
|
9,99 g/dl
|
9,915
g/dl
|
Tidak
normal
|
|
4
|
Darah A
|
9,26 g/dl
|
9,21 g/dl
|
9,235
g/dl
|
Tidak
normal
|
|
5
|
Darah A
|
11,19 g/dl
|
12,09 g/dl
|
11,64
g/dl
|
Tidak normal
|
|
6
|
Darah B
|
10,56 g/dl
|
16,04 g/dl
|
13,3
g/dl
|
Normal
|
|
7
|
Darah B
|
12,28 g/dl
|
13,72 g/dl
|
13
g/dl
|
Normal
|
|
8
|
Darah B
|
12,66 g/dl
|
13,30 g/dl
|
12,98
g/dl
|
Normal
|
|
9
|
Darah B
|
12,89 g/dl
|
13,24 g/dl
|
13,065 g/dl
|
Normal
|
|
10
|
Darah B
|
9,77 g/dl
|
12,04 g/dl
|
10,90
g/dl
|
Normal
|
|
11
|
Darah B
|
13 g/dl
|
13,83 g/dl
|
13,41
g/dl
|
Normal
|
3. Pengamatan
HCT
|
No
|
Perlakuan
|
Pengamatan
|
|
1
|
Mengisi tabung mikrokapiler
dengan darah sampai ¾ bagian
|
Darah berwarna merah
|
|
2
|
Menutup salah satu ujung tabung
dengan vitrex
|
Tabung mikrokapiler tersumbat dan darah tidak bisa
keluar dari tabung
|
|
3
|
Dicentrifuge dengan kecepatan
1500 rpm (10 – 15 )
|
Sel – sel darah mengendap
|
|
4
|
Membaca hasil dengan hematokrit
|
1. Nilai
HCT = 40 %
2. Nilai
HCT = 42 %
|
·
Hasil penentuan kadar
Hb metode fotometrik
|
Kelompok
|
Sampel
|
X1
( % )
|
X2
( % )
|
X (
% )
|
Keterangan
|
|
1
|
Darah A
|
35 %
|
45 %
|
40
%
|
Normal
|
|
2
|
Darah A
|
35 %
|
40 %
|
37,5%
|
Normal
|
|
3
|
Darah A
|
37 %
|
40 %
|
38,5
%
|
norma
|
|
4
|
Darah A
|
57 %
|
49 %
|
53
%
|
Tidak
normal
|
|
5
|
Darah A
|
42 %
|
43 %
|
42,5
%
|
Normal
|
|
6
|
Darah B
|
43 %
|
42 %
|
42,5
%
|
Normal
|
|
7
|
Darah B
|
47 %
|
47 %
|
47
%
|
Tidak
normal
|
|
8
|
Darah B
|
47 %
|
45 %
|
46
%
|
Tidak
normal
|
|
9
|
Darah B
|
40 %
|
42 %
|
41
%
|
Normal
|
|
10
|
Darah B
|
46 %
|
47 %
|
46,5
%
|
Tidak
normal
|
|
11
|
Darah B
|
40 %
|
42 %
|
41
%
|
Normal
|
|
12
|
Darah B
|
32 %
|
35 %
|
33,5
%
|
Normal
|
VII.
Pembahasan
Dari percobaan diatas dapat diketahuai bahwa hemoglobin
berdasarkan perhitungan dengan metode sahli dari berbagai kelompok menunjukkan
sampel darah yang diamati ada yang normal dan ada yang tidak normal, untuk
kategori normal yaitu: kelompok 5, 7, 8, 9, 10, dan 11.Sedangkan kategori yang
tidak normal yaitu : kelompok 1, 2, 3, 4,dan 6. Dapat dipengaruhi dari berbagai
faktor eksternal ,seperti kebersihan alat, atau reagen yang tercampur dengan
senyawa atau sampel lain, meskipun hanya sedikit. ( Kurniawan, 2010 )
Pengukuran Hb dengan metode sahli paling banyak
dipakai di Indonesia dengan kesalahan ± 10%. Walaupun cara ini tidak dapat 100%
akan tetapi masih dianggap cukup baik untuk mengetahui apakah seseorang
kekurangan Hb darah. Kelemahan metode ini dalah kenyataan bahwa kaorimetri
visual tidak teliti bahwa kematian asam itu bukan merupakan larutan sejati dan
bahwa alat itu tidak bisa ditandaskan. ( Kurniawan, 2010 )
Metode yang digunakan berikutnya dengan menggunakan
fotometrik. Didapatkan kadar Hb lebih teliti dari pada cara visual ( sahli ).
Kesalahannya sekitar 2%.
Metode
ini mempunyai banyak cara, yaitu :
1. Sianmethemoglobin
2. Oxihemoglobin
3. Alkali
hematin
Dari
berbagai cara diatas,metode yang paling tepat adalah Sianmethemoglobin. (Bimantoro,
2011 )
Dapat dilihat dari kelompok kami bahwa
dengan metode sahli dan fotometrik ada perselisihan angka meskipun tidak jauh
berbeda, yaitu pada ulangan pertama 13,2 %, sedangkan ulangan kedua 12,4 %
sehingga mendapatkan rata – rata 12,8 %.Pada saat penetesan atau penambahan
reagen terhadap sampel, kemungkinan yang terjadi adalah tetesan pipet tidak
sepenuhnya tercampur, disebabkan karena tetesan mengalir dari ujung wadahnya
yaitu tabung reaksi sahli, sehingga perbedaan datanya dapat terjadi walaupun
sempelnya sama namun proses kerja dalam menentukan tujuan akan berbeda dari
tiap - tiap kelompok.
VIII.
Kesimpulan
Pengukuran kadar Hb dengan metode sahli
menunjukkan hasil normal 12,8 g/dl, sedangkan pengukuran kadar Hb dengan metode
fotometrik menunjukkan hasil normal 13,065 g/dl, dan untuk pengukuran
hematokrit menunjukkan nilai normal, yaitu 41 %.
terima kasih
BalasHapus